Стр. 57 - Северин С.Е. (ред.) Биологическая химия с упражнениями и зад

Упрощенная HTML-версия

56
Модуль
1.
Строение , свойства и функции белков
соотношению полярных и непол.ирных радикалов аминокислот на
поверх ности молекул:
степени устойч ивости к воздействию разл нчны х денатурирующих
агентов.
2.
Растворимость беJ1ков зависит от свойств бе,1ков. пере•••• сленных выше.
а также от состава среды. в которой растворяется белок (значен 11я рН. солево­
го состава, температуры. 11ал и•1ия других органических веществ. С IIОсобных
вза имодеiiствовать с белком). Величина заряда белковых молскул
-
один
из факторов, Rлияющих на их растворимость. При потере заряда о юоэлек­
трнческой точке белки легче агрегируют и выпадают в оса.1ок. Это особен110
хара ктерно дл я денатурированных белков , у которых на поверхности оказы-
ваются гидрофобные радикалы аминокислот.
.
На поверхности белковой ~юлекулы имеются как r юложительно , так
11
отринательно заряженные радикалы аминокислот. Колнчество этих групп,
а слсдователь110, и суммарный заряд белков зависят от рН среды, т.е. соот­
ношении концентрации н+- и он--гру пп . в кислой среде повышение
коннснтрации н+ приводит к подавлению диссониации карбоксилt,JIЫХ
групп -соо- + н+>- СООН и понижению отрицательного заряда бел ков.
В щелочной среде связывание избытка он- протонами, образующимиен
при диссоциации аминогрупп
- NH/
+ ОН- -
NH
2
+
Н
2
0 с образованием
воды, nриводит к уменьшению положительного заряда белков. Зна••ею1с рН .
nри котором белок имеет суммарный нулевой заряд, называется изоэлектри­
ческой точкой (ИЭТ). В ИЭТ число положительно и отрицательно заряжен­
ных групп одинаково. т.е. белок наход~пся
13
изоэлектрическом состоян ии .
3.
Разделение индивидуальных белков . Особенности строення
11
функцио-
11ирова11ия организма зависят от набора бел ков, синтезирующ нхся в нем.
Изучение строения ~1 свойств бел ков невозможно без их выделения 11з клетки
и очистки от других белков и органи•1еских молекул. Стадии вьшеления и
очистки индивидуал ьных белков:
Разрушение клеток изучаемой ткани и полу•1ение гомогената.
Разделение гомогената на фракции центрифугирова11ием. получе11ие
ядерной. митохондриальной, uитозольной или иной фракции. содер­
жащей искомый белок.
Избирательная тепловая денатурация
-
кратковремен нос нагрева­
нис раствора белков. при котором можно улалить •1асть денатуриро­
ванllьtх белковых nримесей (в том слу•ше, если белок относительно
термостабилен).
Высаливаtше. Разли чные белки выпада ют я осадок nри разных кон ­
нс•нрациях соли
13
растворе. Постеnенно повыша я KOIHteнтpatJ.ИIO
соли, можно полу•111Ть ряд отдельных фракциli с преимущественным
содсржа1111ем вылеляемого белка в од ной из них . Н аиболее часто д,1я
фракционирования белков используют сульфат аммон11я. Бел ки с
наимс11ьwей растворнмостью выпада ют в осадок при небольших кон­
центрациях солей.