Стр. 58 - Северин С.Е. (ред.) Биологическая химия с упражнениями и зад

Упрощенная HTML-версия

Модульная единица
2
57
Гель-Ф ••льтрация - метод просеивания молекул через набухшие грану­
лы сефалекса (трехмерные nолисахаридвые цепи декстра на. иr.1 еюшие
поры). Скорость прохождения белков через колонку, заполненную
сефадексом. будет зависеть от их молекулнрной массы: чем меньше
масса молекул белка. тем ,1еrче они проникают внутрь гранул н доль­
ше там задерживаются, чем бол ьше масса , тем быстрее они элю11руют
с колон ки.
Ультра центрифугирование - метод. заключающ иiiся в том, что белки
в uентрифужной nробирке nомещают в ротор ультрацентрифун1.
При вращении ротора скорость оседан ин бел ков проnорЦiюнальна
их моле кулярной массе: фракции более тяжелых белков расnоложены
ближе ко дну nробирки, более легкие- ближе к nоверхности.
Электрофорез
-
метод , в основе которого лежат рюл 11 ЧIHI
13
скоро­
сти движении белков в электрическом nоле. Эта nел ичин а nропор­
ционал ьна заряду бел кон. Электрофорез бел ко13 проводят на бумаге
(13
::>том случае скорость движения белков nроnорuионал ьна только их
за рнду) и л и
J3
nолиакрила мидном геле с определенной оел ичино i1 п ор
(скорость дви жен и я бел ков п роnорционал ьна их заряду и молскул ир ­
ной массе).
Иоttообменная хроматоrрафия
-
метод фра кцион и рооа
11
и я, основа н­
ный на соязыва нии ионизированных груnп белков с противоnоложно
заряженны ми груnnами ~юнообменных смол (нерастворимых nоли­
мерных м атери алов). Прочность связывания белка со смолой nропор­
шюнальна заряду бел ка . Белки, адсорбированные на иоиообменном
nол и мере, можно см ыть растворами
NaCI
с возрастающими концен­
траuиs1м11 ; чс~t меньше заряд белка, тем меньшая концентрацин
1
aCI
потребуется. чтобы смыть белок, связаниый с ионогениы ми груГiпами
смол Ьl.
Аффин ная х роматоrрафия
-
наиболее сnецифический метод выделе­
н ия и ндивидуальных белков. К инертному полимеру ковалентно прl! ­
соединяется ли ганд какого-л ибо белка. П ри пропускани и раствора
белков через колонку с nолимером за счет комn лементарного связыва­
ния белка с л и ганлом на колонке адсорбируется тол ько специфичный
для да нного лиганда белок.
Диалю - метод, nрименяемый для удаления низкомолекулярных сое­
линений из раствора выдел яемого белка. Метод основан на нссnособ­
НОL:Ти бслко1:1 11роходить через nолуnроницаемую мембрану в отли•1ие
от ниэкомолекулярных веществ. Прн ~tенястся дл я очистки бел ков от
1111 зком олекуля р11ых лримесей, наприме р от солей nосле 11ЫС<1J I ИВа­
н ИЯ.