Стр. 17 - А.Я.Николаев - Биологическая химия (2004)

Упрощенная HTML-версия

2 2
Часть I. Строение информационных молекул и матричные биосинтезы
но служит предшественником другого пептида — ангиотензина II, регулирующе­
го кровяное давление.
Для определения аминокислотного состава белки (пептиды) подвергают гид­
ролизу:
R
R
R
R
I
I
I
I
H2N - C h - C o - ( N h - C h - C o ) v7- N h - C h - C o o h + ( * -
i )H2o
=(^)H2N -
сн— с о о н
В нейтральной среде эта реакция протекает очень медленно, но ускоряется в
присутствии кислот и щелочей. Обычно гидролиз белков проводят в запаянной
ампуле в растворе соляной кислоты (6 м оль /л ) при 105 °С; в таких условиях пол­
ный распад происходит примерно за сутки. Затем аминокислоты гидролизата раз­
деляют методом хроматографии на ионообменных смолах, выделяя отдельно каж­
дую аминокислоту.
Для обнаружения аминокислот во фракциях, получаемых при хроматографии,
используют реакцию с нингидрином (рис. 1.4).
О
ОН
+ H ,N— CH— COOH
ОН
Il
О
о
о
0 0
=N—C O +н“ ^=о +с°2+зНг°
о
о н
Рис. 1.4.
Реакция нингидрина с аминокислотами
В этой реакции бесцветный нингидрин превращается в продукт красно-фио­
летового цвета. Измерив интенсивность окрашивания, можно рассчитать концен­
трацию каждой аминокислоты в гидролизате и число остатков каждой из амино­
кислот в исследуемом белке. Такой анализ проводят с помощью автоматических
приборов — аминокислотных анализаторов (рис. 1.5). В прибор загружают гид­
ролизат белка, и все остальные операции производятся автоматически. Результат
анализа прибор выдает в виде графика концентраций отдельных аминокислот.
Частота, с какой разные аминокислоты встречаются в белках, неодинакова.
Например, глицин обнаруживается в 10 раз чаще, чем триптофан: из каждой ты­
сячи аминокислотных остатков в белках на долю глицина приходится около 70,
на долю триптофана — около 7. Остальные аминокислоты по частоте нахожде­
ния в белках занимают промежуточное положение, образуя такой ряд: (аланин ~
валин = лейцин ~ серин) > (глутаминовая кислота ~ глутамин = лизин = аргинин =
пролин) > (аспарагиновая кислота = аспарагин = изолейцин ~ треонин = фенила­
ланин) > (тирозин = цистеин = метионин = гистидин). В табл. 1.2 приведен амино­
кислотный состав некоторых белков.