Стр. 54 - А.Я.Николаев - Биологическая химия (2004)

Упрощенная HTML-версия

Глава I. Строение, свойства и функции белков
5 9
активность будет возрастать; по степени возрастания удельной активности можно
судить об эффективности каждой стадии очистки. Если начиная с какой-то стадии
очистки удельная активность больше не увеличивается, то можно считать, что уда­
лены все посторонние белки, т. е.
получен
индивидуальный (гомогенный) белок.
Величина, показывающая, во сколько раз возросла удельная активность в процес­
се очистки, называется степенью очистки (см. табл. 1.9).
ш я ш ш ш я т я я »
ШЯтшШШШШШЩШ0аВтМ
Cia.iHH
OHticiKH
I l l i i i e i
Объем
раствора,
M .I
Обшяи
концент­
рация
белков,
MI/мл
Актив­
ность,
ед/м.1
У'
1
С.
1
Ы
1
яя
ак
1
иинм.п.
ед. на I mi
Выход,
ИММИИМЙ
Степень
ОЧНСГКИ
Экстракт
440.0
3,00
15
5
100
1,0
Нагревание при 55 0C
в течение 5 мин
420,0
1,25
15
24
95
4,8
Осаждение сульфатом
аммония (40-70
%
насыщения)
3,6
1,00
80
80
45
16,0
Хроматография на
сефадексе G -100
1,5
0,45
120
260
28
52.0
Аффинная
хроматография
1,5
0,90
HO
1200
25
240,0
Кристаллизация
1,0
0,05
130
2600
20
520,0
Перекристаллизация
1,0
0,05
130
2600
20
520,0
В процессе очистки неизбежны потери выделяемого белка: они связаны с де­
натурацией, а также с частичным попаданием выделяемого белка во фракции,
которые отбрасываются.
При очистке каждого белка приемы и их последовательность подбираются
эмпирически, методом проб и ошибок. Поэтому разработка процедуры выделения
нового белка остается сложной и трудоемкой задачей.
ИЗМЕНЕНИЯ БЕЛКОВОГО СОСТАВА ОРГАНИЗМА
Общая концентрация белков в клетке, как правило, близка к 20 %, а в некоторых
клетках заметно больше (например, в эритроцитах 35 %). В клеточных органел-
лах концентрация белков еще больше (например, в матриксе митохондрий около
40% ).
Белковый состав организма взрослого здорового человека более или менее
постоянен, однако возможны изменения содержания отдельных белков в зависи­
мости от физиологической активности, состава пищи и режима питания, цикли­
ческие изменения (биоритмы). В процессе развития организма, особенно на са­
мых ранних стадиях (от зиготы до формирования дифференцированных органов
со специализированными функциями), белковый состав изменяется значительно.
В основе различий структуры и функции специализированных клеток лежат раз­
личия их химического состава, прежде всего белкового. Например, эритроциты
содержат гемоглобин, обеспечивающий транспорт кислорода кровью; мышечные